органический растворитель

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ - СТРУКТУРА И ФУНКЦИЯ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ ~ Вопросы медицинской химии medi.ru »» Периодика »» Вопросы медицинской химии »» № 5 2000 МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ "СТРУКТУРА И ФУНКЦИЯ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ" 11-13 октября 2000 года в Институте биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича РАМН состоялась научная конференция на тему "Структура органический растворитель функция протеолитических ферментов". Конференция была посвящена памяти академика РАМН Василия Николаевича Ореховича (11.01.1905-12.10.1997) и знаменательному событию в жизни Института биомедицинской химии - присвоению Институту имени В.Н. Ореховича. С именем В.Н. Ореховича связано становление белковой органический растворитель медицинской химии в нашей стране, создание школы по изучению протеолитических ферментов. Под руководством В.Н. Ореховича было открыто три новых тканевых протеиназы, которые занесены в Международную номенклатуру ферментов. Его работы по изучению структуры органический растворитель функции белков в норме органический растворитель патологии получили мировое признание органический растворитель были отмечены целым рядом международных органический растворитель отечественных наград. В.Н. Орехович стоял у истоков создания Института биомедицинской химии РАМН, бессменным директором которого он был почти 40 лет. Присвоение Институту имени Ореховича является признанием заслуг Василия Николаевича как ученого органический растворитель организатора науки в нашей стране органический растворитель высокой оценкой труда органический растворитель достижений научного коллектива, которым он руководил много лет. В организации конференции принимали участие Российская академия медицинских наук, НИИ биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича РАМН, Российский фонд фундаментальных исследований органический растворитель Институт "Открытое общество. Фонд содействия". В работе конференции приняли участие свыше 150 человек. На конференции были рассмотрены следующие основные проблемы: 1. Структура органический растворитель механизм действия протеиназ. 2. Функции протеолитических ферментов в норме органический растворитель при патологии. 3. Протеолитические ферменты в белковой инженерии органический растворитель пептидном синтезе. 4. Протеолитические ферменты органический растворитель их ингибиторы в биотехнологии и медицине. 5. Ангиотензин-превращающий фермент органический растворитель его ингибиторы. Вашему вниманию предлагаются тезисы докладов, представленных на конференции, а также часть отобранных оргкомитетом тезисов не вошедших в программу устных сообщений. СТРУКТУРА И ФУНКЦИИ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ РОЛЬ ТРЕХМЕРНОЙ СТРУКТУРЫ В ФУНКЦИЯХ И СВОЙСТВАХ АСПАРТАТНЫХ ПРОТЕИНАЗ Н.С. АНДРЕЕВА Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта Российской Академии Наук Описание трехмерной (3D) структуры аспартатных протеиназ лишь в терминах укладки элементов вторичной структуры не позволяет установить структурные основы их специфических свойств. Эта укладка универсальноа для всех аспартатных протеиназ органический растворитель является их неотъемлемой характеристикой. Данные о ней весьма эффективно могут быть использованы для работы по выравниванию первичных структур, которая, в свою очередь, может служить основой для выявления особых участков полипептидной цепи, характерных уже для определенных ферментов и для выявления местонахождения этих участков в пространственной структуре молекул. Систематический поиск таких особых участков, описание их пространственного положения органический растворитель взаимодействий с соседними группами молекул, связь таких локальных структур, как с характерными свойствами определенных ферментов, так органический растворитель с общими свойствами аспартатных протеиназ - работа, которая требует своего развития органический растворитель которая пока представлена главным образом описанием зоны активного центра органический растворитель участков связывания субстрата. Несмотря на огромный материал, накопленный к настоящему времени как по трехмерным структурам аспартатных протеиназ, так органический растворитель по их энзимологии, множество проблем, связанных с их свойствами органический растворитель функциями, остаются еще не решенными, органический растворитель здесь, в первую очередь, необходимо сказать о возможной роли групп, находящихся на некотором отдалении от активного центра. Роль таких групп была продемонстрирована в свое время нами при поиске структурных основ особых эллектрофоретических свойств пепсина, при анализе стабильности молекул аспартатных протеиназ, при анализе роли подвижной петли, нависающей над карманами связывания субстрата и при изучении роли консервативных молекул воды, встроенных в определенные участки белковых глобул органический растворитель являющихся их неотъемлемой частью. СТЕРЕОХИМИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ МЕХАНИЗМА ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ АСПАРТИЛЬНЫХ ПРОТЕИНАЗ С НЕЙТРАЛЬНЫМ И СЛАБОЩЕЛОЧНЫМ ОПТИМУМОМ pH И.В. КАШПАРОВ, М.Е. ПОПОВ, Л.Д. РУМШ Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина органический растворитель Ю.А. Овчинникова, РАН Аспартильные протеиназы представляют собой многочисленную группу ферментов, встречающихся в организмах животных, растений, грибов органический растворитель ретровирусов. Почти все они, независимо от источника, проявляют способность катализировать реакцию гидролиза пептидных связей в кислой органический растворитель слабокислой среде. Для объяснения особенностей каталитических механизмов функционирования аспартильных протеиназ в условиях низких значений pH предложен целый ряд моделей. Все они предполагают участие в качестве нуклеофильного компонента реакции молекулы воды, связанной с двумя каталитическими остатками аспарагиновых кислот, представляющими собой центральный структурный компонент активного центра этих ферментов. Поскольку слабая нуклеофильность воды практически исключает эффективную атаку резонансно стабилизированной пептидной группы субстрата, было предположено, что в свободном ферменте один из остатков аспарагиновой кислоты ионизирован и способен, акцептируя протон, служить активатором атакующего расщепляемую связь нуклеофила, тогда как второй – протонирован органический растворитель способен играть роль донора протона (электрофильного активатора) для расщепляемой связи субстрата. Сравнительно недавно было экспериментально показано, что существование изначальной асимметрии электронного состояния карбоксильных групп каталитических аспарагиновых кислот не является строго обязательной чертой структурно-функциональной организации этих ферментов, органический растворитель что в активных центрах свободных аспартильных протеиназ оба остатка Asp могут находиться в ионизированном состоянии. Действительно, известны представители аспартильных протеиназ, способные функционировать в нейтральной органический растворитель даже слабощелочной среде, то есть в условиях, при которых протонирование карбоксильной группы Asp маловероятно. В настоящем сообщении обсуждаются результаты молекулярного моделирования фермент-субстратных комплексов аспартильных протеиназ, органический растворитель также новая стереохимическая модель механизма их действия, предполагающая возможность согласованной активации нуклеофила органический растворитель субстрата путем переноса протона с нуклеофильной молекулы воды непосредственно на кислород гидролизуемой пептидной группы субстрата. О МЕХАНИЗМЕ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ ПЕПТИДГИДРОЛАЗ Л.М. ГИНОДМАН Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина органический растворитель Ю.А. Овчинникова РАН К настоящему времени весьма обстоятельно охарактеризованы различные аспекты механизма действия пептидгидролаз. Наиболее важные данные были получены методами рентгеноструктурного анализа, химической модификации, а также в результате биохимических исследований. Существенным этапом исследований явилось установление механизма катализа, осуществляемого различными пептидгидролазами (нуклеофильный или общий основной катализ). Первоначально высказывалось предположение о том, что все пептидгидролазы, подобно химотрипсину, функционируют по механизму нуклеофильного катализа. Однако эта точка зрения не получила подтверждения. Определяющий вклад в решение рассматриваемого вопроса внесли исследования, проведенные коллективом сотрудников, руководимых В.Н. Ореховичем в период 1962-68 гг (в лаборатории химии белка Института химии природных соединений АН СССР). Затем в 70-80 гг. исследования были продолжены в лаборатории химии ферментов Института биоорганической химии РАН под руководством чл.-корр. РАН В.К. Антонова. Основными объектами исследований являлись реакции, катализируемые пептидгидролазами, в первую очередь, реакции транспептидации. Реакции проводились в среде тяжелокислородной воды (Н218О). Предложенный подход основывался на различии характера промежуточных соединений, образующихся в процессе расщепления пептида при нуклеофильном (Е-Х-СО-R) органический растворитель общем основном (Е-ХН . Н18О-CO-R) механизмах катализа; где Е-Х(Н) – фермент, органический растворитель -СО-R – остаток ацильной части пептидного субстрата. Определяли, происходит или не происходит включение 18О из Н218О в определенные группировки продукта (или субстрата) реакции. В результате проведенных исследований было установлено, что сериновые (химотрипсин) органический растворитель тиоловые (папаин) пептидгидролазы функционируют по механизму нуклеофильного катализа, органический растворитель аспартатные (пепсин) органический растворитель металлопептидгидролазы (карбоксипептидаза А, термолизин) – по механизму общего основного катализа. В сообщении будут рассмотрены также современные представления о функционировании АТР-зависимых протеиназ. ПРОСТРАНСТВЕННАЯ СТРУКТУРА ГЛУТАМИЛ-СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЭНДОПЕПТИДАЗЫ B. INTERMEDIUS ПРИ РАЗРЕШЕНИИ 1,5 A И.П. КУРАНОВА1, Е.В. БЛАГОВА1, В.М. ЛЕВДИКОВ1, Р. МЕЙДЖЕР2, В.С. ЛАМЗИН2, Г.Н. РУДЕНСКАЯ3, С.В. КОСТРОВ4 И Г.Г. ЧЕСТУХИНА5 1Институт кристаллографии РАН, Москва 2Европейская Лаборатория Молекулярной Биологии (EMBL, Hamburg) 3Химический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва 4Институт молекулярной генетики РАН, Москва 5ГНИИГенетика, Москва Трехмерные наборы интенсивностей диффракционных отражений от кристаллов глутамил-специфической эндопептидазы B. intermedius органический растворитель ее комплекса с трипептидом собраны с использованием синхротронного излучения при температуре около 120К с использованием imaging plate в качестве детектора (EMBL, Hamburg). Пространственная структура глутамил-эндопептидазы B. intermedius при разрешении 1,5 A установлена методом молекулярного замещения с использованием в качестве стартовой модели токсина А из St. aureus. Структура уточнена до Rf 15,6%. Структура эндопептидазы в комплексах с МПД органический растворитель с трипептидом Z-Аla-Ala-Glu установлена при разрешении 1,75 A, Rf 17,6%. Показано, что подобно другим сериновым протеазам, молекула эндопептидазы состоит из двух доменов; однако, в отличие от других протеаз этого семейства, субстрат-связывающий домен эндопептидазы имеет уникальную топологию органический растворитель вместо b-баррела содержит b-слой из 4-х параллельных b-стрэндов органический растворитель двух спиралей. Пространственное расположение органический растворитель конформация остатков каталитической триады (Ser, Asp, His) совпадают с положением этих остатков в других сериновых протеазах, несмотря на низкую степень гомологии первичных структур органический растворитель различие в количестве дисульфидных связей. Расположение органический растворитель строение участка, ответственного за специфическое связывание субстрата, установлено путем совмещения по С атомам атомных моделей эндопептидазы B. intermedius органический растворитель Glu-специфической эндопептидазы S. griseus в комплексе с тетрапептидом Z-Аla-Ala-Pro-Glu органический растворитель подтверждено результатами исследования структуры комплекса эндопептидазы B. intermedius с трипептидом Z-Ala-Ala-Glu. Показано, что в связывании заряда глутаминового остатка субстрата участвуют Ser166, His186 органический растворитель аминогруппа Val 1. На основе полученных данных рассматриваются эволюционные связи в семействе глутамил-специфических протеаз. Работа поддержана Российским Фондом Фундаментальных Исследований, грант 00-04-48280. ЭНЕРГОЗАВИСИМЫЙ СЕЛЕКТИВНЫЙ ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЙ ПРОТЕОЛИЗ Т.В. РОТАНОВА Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина органический растворитель Ю.А. Овчинникова РАН Селективный внутриклеточный протеолиз – важный механизм контроля качества функциональных белков органический растворитель поддержания их необходимого уровня в клетках. И у прокариот, органический растворитель у эукариот этот процесс осуществляется высокомолекулярными мультимерными энергозависимыми протеиназами, которые выполняют две основные функции: деструктивную (освобождают клетки от дефектных, поврежденных и мутантных белков) органический растворитель регуляторную (осуществляют деградацию ряда короткоживущих регуляторных белков). Энергозависимые протеиназы – особая группа протеиназ, обладающих целым рядом уникальных характеристик. Протеолитическая активность этих ферментов сопряжена с гидролизом АТР. Ферменты проявляют высокую селективность, поскольку производят отбор субстратов-мишеней из общего пула внутриклеточных белков, большая часть которых не должна повреждаться. При этом специфичность по отношению к аминокислотам, образующим расщепляемую связь, у энергозависимых протеиназ зачастую не выражена. Деградация белков-субстратов происходит по процессивному механизму – без высвобождения высокомолекулярных промежуточных продуктов. Среди АТР-зависимых протеиназ обнаружены сериновые протеиназы с классической каталитической триадой, металлопротеиназы, протеиназы с каталитически активным N-концевым остатком треонина. Все известные энергозависимые протеиназы являются либо гомо- либо гетероолигомерами. Основные проблемы при исследовании АТР-зависимых протеиназ определяются особенностями этих ферментов органический растворитель состоят в установлении принципов отбора белковых субстратов органический растворитель механизма сопряжения гидролиза АТР органический растворитель протеолиза. CОПРЯЖЕНИЕ ПРОТЕОЛИЗА И ГИДРОЛИЗА АТР ПРИ ФУНКЦИОНИРОВАНИИ Lon-ПРОТЕИНАЗЫ E. coli К.Б. ЦИРУЛЬНИКОВ, Э.Э. МЕЛЬНИКОВ, Л.М. ГИНОДМАН, Т.В. РОТАНОВА Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина органический растворитель Ю.А. Овчинникова РАН Lon-протеиназа E. coli - гомоолигомерный фермент, протеолитическая активность которого сопряжена с гидролизом АТР. Эндогенными субстратами фермента являются поврежденные, чужеродные органический растворитель некоторые регуляторные белки. К числу основных проблем при изучении Lon-протеиназы относятся установление механизма сопряжения активностей органический растворитель выяснение роли четвертичной структуры фермента в процессе АТР-зависимого протеолиза. При сравнительном исследовании АТР-азной, протеолитической органический растворитель пептидгидролазной активности нативной Lon-протеиназы органический растворитель ее мутантной по АТР-азному центру формы Lon-K362Q установлено: (1) необходимый активатор протеолиза – комплекс АТР-Mg - не влияет на связывание субстратов в протеолитическом центре, но активирует гидролиз пептидной связи органический растворитель обеспечивает процессивный механизм деградации белковых субстратов; (2) мутант Lon-K362Q не способен расщеплять белковый субстрат, но гидролизует низкомолекулярный субстрат с эффективностью, сопоставимой с эффективностью нативного фермента, причем активатором протеолитических центров в этом случае оказывается не только ATP-Mg, но органический растворитель ингибитор нативной Lon-протеиназы – ADP-Mg; (3) в отсутствие АТР связывание олигопептидного субстрата активирует протеолитические центры органический растворитель нативной Lon-протеиназы и мутанта Lon-K362Q. АТРазная активность нативной Lon-протеиназы не изменяется в присутствии низкомолекулярного субстрата, но увеличивается при связывании олигопептидного или белкового субстратов. Гидролиз АТР мутантом Lon-K362Q значительно понижен и не стимулируется белковым субстратом; связывание олигопептида с мутантом вызывает снижение эффективности гидролиза АТР. В отсутствие эффекторов раствор Lon-протеиназы представляет собой гетерогенную по олигомерности систему с большим количеством агрегатов, однако, в присутствии АТР-Mg фермент функционирует как тетрамер. Мутант Lon-протеиназы Lon-K362Q в этих условиях образует мономеры. Таким образом, функции олигомерной структуры заключаются, во-первых, в обеспечении селективного узнавания белковых субстратов Lon-протеиназой; во-вторых, в регуляции функционирования протеолитических центров путем внутрисубъединичной или/и межсубъединичной передачи сигналов от АТРазных центров. К ВОПРОСУ О ФУНКЦИИ ПРОПЕПТИДОВ В СТРУКТУРЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ПРОТЕАЗ Г.Г. ЧЕСТУХИНА, А.В. СЕРКИНА, А.Б.ШЕВЕЛЕВ Лаборатория химии белка им В.М. Степанова ГУП ГосНИИ Генетика Наличие вспомогательного фрагмента – пропептида, удаляемого в ходе созревания первично синтезированного предшественника, является характерной особенностью абсолютного большинства известных в настоящее время протеолитических ферментов из самых разнообразных источников. Наличие пропептидов свойственно также практически всем охарактеризованным секреторным белкам бактерий рода Bacillus. Изучение взаимодействия пропептидов протеаз со зрелыми ферментами, как в составе предшественника, так органический растворитель в реассоциированных комплексах имеет богатую историю применительно органический растворитель к бациллярным ферментам, органический растворитель к протеазам из других источников. На многих примерах доказано наличие ингибирующего действия пропептидов на зрелые ферменты в составе нековалентных комплексов, которые часто имеют уникально высокую стабильность. Кроме того, пропептиды принимают участие в фолдинге зрелых ферментов, что наряду с ингибированием может играть роль в дополнительной защите микроорганизма-хозяина. В отличие от функций, связанных с внутримолекулярными взаимодействиями пропептидов органический растворитель зрелых ферментов в составе предшественника, межмолекулярные взаимодействия пропептидов органический растворитель предшественников протеаз с внешними контролирующими активацию механизмами клетки практически не изучались. Поэтому одной из основных целей нашей работы являлась разработка подходов к поиску структурных особенностей пропептидов, обеспечивающих регулирующие активацию предшественника контакты с другими белками клетки-хозяина. В рамках работы нами сконструирована оригинальная система, позволяющая получать предшественник металлозависимой эндопептидазы термофильной бактерии Brevibacillus brevis в клетках E. coli непосредственно в нативной форме. Этот результат является первым в мире опубликованным примером такого рода работ. По-видимому, успех работы связан с необычно высокой константой связывания пропептида металлоэндопептидазы B. brevis со зрелым ферментом при пониженной против физиологической нормы этого фермента температуре 37°С. При этом активация предшественника фермента легко может быть достигнута его прогреванием при 65°С. Возможность контролируемого включения механизма самоактивации при прогревании дает ранее недоступный для исследований инструмент изучения механизмов контроля этого процесса, реализующегося в природных условиях. Помимо этого нами было установлен факт наличия вторичных взаимодействий молекул предшественника металлоэндопептидазы B. brevis друг с другом. Аналогичная особенность была описана ранее для предшественника субтилизина Е B. subtlis. На этом основании выдвинуто предположение о существенной роли олигомеризации в распознавании предшественников транспортными системами бацилл. Наконец, в нашей лаборатории впервые успешно осуществлен эксперимент по конструированию искусственных генов металлопротеаз, содержащих делеции пропептидов различной длины. В частности, был получен ген металлопротеиназы Bacillus amyloliquefaciens с делецией 30 N-концевых аминокислотных остатков пропептида без потери функциональности органический растворитель секреторной способности продукта. С использованием клеток L-форм Proteus mirabilis удалось доказать принципиальную возможность зрелой металлокарбоксипептидазы Т Thermoactinomyces vulgaris секретироваться органический растворитель принимать активную форму в отсутствие пропептида. ОГРАНИЧЕННЫЙ ПРОТЕОЛИЗ ХИМЕРНЫХ БЕЛКОВ ЭНТЕРОПЕПТИДАЗОЙ И ТРОМБИНОМ ПО ИХ СПЕЦИФИЧЕСКИМ ЛИНКЕРАМ Е.Д. ШИБАНОВА, Н.И. ДЕРГОУСОВА, Е.А. АЗЕЕВА, Л.Д. РУМШ Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина органический растворитель Ю.А. Овчинникова РАН Для наработки чужеродных целевых белков в клетках E.coli часто используется подход, при котором их синтез происходит с клонированных гибридных генов в составе химерного белка. Белок-носитель при этом может обеспечивать синтез целевого белка, эффективную очистку продукта экспрессии на аффинном сорбенте, способствовать фолдингу химерного белка органический растворитель его растворимости в цитоплазме клетки. Белок-носитель в этих случаях соединен с целевым полипептидом линкером, узнаваемым органический растворитель гидролизуемым высокоспецифичной протеиназой. Однако, часто ферментативный гидролиз химерных белков происходит с низкой эффективностью и не только по специфическому сайту. В некоторых случаях химерный белок оказывается устойчив к действию фермента. Исследован гидролиз химерных белков, содержащих соответствующие линкеры, ферментами – энтеропептидазой органический растворитель тромбином зависимости от способа их получения (растворимая форма в цитоплазме или тела включения) органический растворитель условий рефолдинга из тел включения. Показано, что при рефолдинге из тел включения в зависимости от температуры химерные белки, содержащие специфический линкер для энтеропептидазы, образуют как гидролизуемые, так органический растворитель устойчивые к гидролизу энтеропептидазой формы, являющиеся конкурентными ингибиторами фермента с Кi=10-6 M. В результате рефолдинга химерных белков, содержащих специфический линкер для тромбина, в зависимости от условий денатурации их из тел включения (6M гуанидин гидрохлорид, 8M мочевина или 2% сульфобетаин) в растворе образуются гидролизуемые и негидролизуемые формы, органический растворитель также происходит расщепление химерного белка по неспецифическому сайту. Предполагается, что эффективность гидролиза протеиназами по специфическим протяженным линкерам (4-6 аминокислотных остатков) определяется не только аминокислотной последовательностью области связывания, но органический растворитель в значительной степени пространственной организацией белковой глобулы в целом. ФУНКЦИИ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИ АКТИВАТОРЫ ПЛАЗМИНОГЕНА В ПРОЦЕССАХ АНГИОГЕНЕЗА И РЕМОДЕЛИРОВАНИЯ СОСУДОВ В.А. ТКАЧУК, О.С. ПЛЕХАНОВА, М.А. СОЛОМАТИНА, Д.О. ТРАКТУЕВ, З.И. ЦОКОЛАЕВА, Е.В. ПАРФЕНОВА Российский кардиологический научно-производственный комплекс МЗ РФ, 121552, Москва, 3-я Черепковская, 15-а Ключевыми процессами ремоделирования сосудистой стенки при атеросклерозе, рестенозе, органический растворитель также при ангио- органический растворитель артериогенезе является активация миграции и пролиферации сосудистых эндотелиальных органический растворитель гладкомышечных клеток (ГМК), перестройка внеклеточного матрикса. Регуляция этих процессов осуществляется факторами роста органический растворитель системой протеаз, среди которых ведущую роль играет система активаторов плазминогена, представленная двумя протеазами – тканевым и урокиназным активаторами плазминогена. Они превращают неактивный зимоген плазминоген в плазмин – протеазу широкой специфичности, расщепляющую фибрин и белки внеклеточного матрикса. Ведущая роль в обеспечении миграции сосудистых клеток принадлежит урокиназному активатору плазминогена (урокиназе), который, связываясь на поверхности клеток со специфическим рецептором, обеспечивает образование плазмина в строго определенных участках клеточной поверхности, что позволяет осуществлять направленную деградацию внеклеточного матрикса при движении клетки. Прямо или через образование плазмина урокиназа осуществляет высвобождение органический растворитель активацию большого числа факторов роста. Помимо локальной активации протеолиза, урокиназа, взаимодействуя на поверхности клетки с еще не идентифицированными белками-адапторами, активирует внутриклеточные сигнальные пути, что приводит к перестройке цитоскелета, необходимой для миграции клеток, органический растворитель активирует пролиферацию клеток. Уже в первые сутки после повреждения сосуда при экспериментальной баллонной ангиопластике в его стенке наблюдается усиление экспрессии урокиназы и ее рецептора. Динамика этой экспрессии совпадает во времени органический растворитель пространстве с динамикой пролиферации органический растворитель миграции сосудистых ГМК. Периваскулярное нанесение на поврежденный сосуд протеолитически активных форм рекомбинантной урокиназы стимулирует образование неоинтимы органический растворитель неоадвентиции, миграцию органический растворитель пролиферацию ГМК, органический растворитель ингибирующие антитела к урокиназе подавляют все эти процессы. Повышенная экспрессия урокиназы органический растворитель ее рецептора обнаруживается в атеросклеротической бляшке органический растворитель может обусловливать нестабильность бляшки. Поиски подходов к сбалансированному контролю локальной активности урокиназы в сосудистой стенке могут быть перспективными в предотвращении рестенозов, развивающихся после ангиопластики, органический растворитель осложнений, связанных с разрывом атеросклеротической бляшки. КОМПЛЕМЕНТ И БОЛЕЗНИ Л.В.КОЗЛОВ Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии органический растворитель микробиологии им.Г.Н. Габричевского Cистема комплемента, построенная на каскаде протеолитических реакций, осуществляет контроль органический растворитель подержание гомеостаза. Три важные функции системы комплемента напрямую связаны с болезнями. Первая – литическая. Редко встречающиеся полные дефициты какого-либо из компонентов системы неспецифически приводят ко многим заболеваниям инфекционной природы. Вторая – клиренс иммунных комплексов, опсонизированных компонентами комплемента, главным образом, С3 органический растворитель С4. Дефициты в этих случаях влекут за собой целый сонм аутоиммунных заболеваний. Третья - иммунный ответ. В последние годы была установлена ключевая роль системы комплемента в инициации иммунного ответа. Дефициты С3 органический растворитель изотипов С4 ведут к подверженности хроническим инфекционным заболеваниям, бактерионосительству органический растворитель резистентности к вакцинации. Понимание роли системы комплемента в болезнях человека тесно связано с прогрессом в развитии лабораторной диагностики комплемента. В развитии клинической комплементологии прослеживаются следующие направления: 1) определение количественного содержания в сыворотке крови компонентов комплемента; 2) определение функциональной активности компонентов комплемента в сыворотке крови; 3) определение количества и (или) функциональной активности в других биологических жидкостях; 4) определение дефицитов компонентов комплемента (врожденных, приобретенных), а также изотипическая характеристика некоторых компонентов; 5) направленное воздействие на систему комплемента больного путем использования лекарственных средств системного действия (гормональной, цитостатической органический растворитель нестероидной терапии); 6) использование естественных органический растворитель рекомбинантных ингибиторов и регуляторов системы с целью направленного воздействия на комплемент больного; 7) поиски природных органический растворитель направленный синтез экзогенных регуляторов системы комплемента с целью создания новых фармакологических средств, воздействующих на систему комплемента. Определение функциональной активности первых пяти компонентов комплемента показало характерную картину для многих заболеваний, что позволяет проводить дифференциальную диагностику. Гемолитические методы определения функциональной активности представляют определенные неудобства, не всегда адекватны и устарели. Это определило необходимость развития более перспективных – иммуноферментных методов. Количественные иммуноферментные методы для белков системы комплемента не представляют особой новизны, органический растворитель иммуноферментные методы определения функциональной активности индивидуальных компонентов комплемента не были известны в литературе. Нами были разработаны иммуноферментные методы определения функциональной активности некоторых компонентов комплемента: C1q, C4, C3, С1-инг. Методы иммуноферментного определения активности органический растворитель содержания в крови С1-ингибитора создали возможность дифференциальной диагностики отеков. С использованием иммуноферментных тест-систем для определения функциональной активности С4А органический растворитель С4В удалось по соотношению этих активностей проводить изотипический анализ. Впервые были выявлены повышенный уровень дефицитов С4В у бактерионосителей, у больных глаукомой органический растворитель полный дефицит С4А у больных язвой желудка. Представляется полезным проводить скрининг потенциальных регуляторов системы комплемента, участвующих в трех стадиях каскада активации системы: 1) инициации активации классического пути – ингибирования связывания С1q, 2) образования С3 конвертазы – ингибирования активированного C4b органический растворитель 3) образования С5 конвертазы – ингибирования активированного C3b. Для проведения такого поиска нами разработаны соответствующие 3 иммуноферментные тест-системы. Возможность регулировать активность комплемента с помощью лекарственных веществ нового поколения даст в руки врачей мощные средства терапии многих заболеваний, трудно поддающихся лечению до сих пор. ИЗМЕНЕНИЕ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКГО КАСКАДА КОМПЛЕМЕНТА ПОД ДЕЙСТВИЕМ ЭКЗОГЕННОГО ГЕПАРИНА Л.В. ГАЛЕБСКАЯ, И.Л. СОЛОВЦОВА, Е.В. РЮМИНА Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П.Павлова, Санкт-Петербург Исследовано влияние терапевтических концентраций гепарина (0,25-10 ед./мл) на кинетические показатели активности комплемента сыворотки крови человека. Обнаружено ускорение комплемент-зависимого лизиса эритроцитов кролика по альтернативному пути в присутствии низких концентраций гепарина (0,25-0,50 ед./мл) органический растворитель торможение комплемента более высокими (5 органический растворитель более ед./мл) дозами препарата. Торможение альтернативного пути проявлялось, главным образом, в увеличении индукционного периода гемолиза. Гепарин в концентрациях, превышающих 1 ед./мл, вызывал дозозависимое снижение скорости лизиса эритроцитов барана при реципрокном увеличении гемолитической емкости комплемента, что указывает на более "экономное" расходование компонентов системы. Данный эффект сохранялся также в сыворотке, дефицитной по фактору D альтернативного пути активации комплемента. Это свидетельствует о преимущественном ингибировании гепарином классического пути активации комплемента. ТУРБИДИМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПРОЦЕССА ПОЛИМЕРИЗАЦИИ ФИБРИНА В ПЛАЗМЕ КРОВИ И.Г. ЩЕРБАК, Т.Ф. СУББОТИНА, В.П. ФАЕНКОВА, Е.В. РЮМИНА Кафедра биохимии СПбГМУ им. акад. И. П. Павлова, Санкт-Петербург Турбидиметрический метод регистрации формирования фибринового сгустка под действием экзогенного тромбина дает возможность количественной оценки двух этапов этого процесса: образования протофибрилл органический растворитель их латеральной агрегации. Начальная фаза оценивается временем, в течение которого не происходит изменений оптических свойств инкубационной среды. Вторая фаза наступает по достижении достаточного уровня протофибрилл органический растворитель сопровождается нарастанием оптической плотности среды. Динамика светопоглощения позволяет оценивать скорость и продолжительность процесса полимеризации, органический растворитель также судить о концентрации фибриногена (по максимуму кривой). Исследования проводили с использованием пула цитратной плазмы здоровых доноров. Процесс гемокоагуляции инициировали добавлением бычьего тромбина (Каунас) в присутствии ионов Са2+. Изучены изменения турбидиметрических параметров этой системы под воздействием коммерческого гепарина (Biochemie), экстракта Laminaria digitata, полученного нами из высушенных органический растворитель измельченных водорослей, органический растворитель коммерческого препарата коллагеназы из Cl. Histolyticum (Serva). Установлено, что экстракт ламинарии содержит сильный антикоагулянт, действующий подобно гепарину органический растворитель обладающий термостойкостью, органический растворитель также высокой стабильностью при хранении. Противосвертывающий эффект развивается вне зависимости от времени прединкубации с плазмой. Как органический растворитель гепарин, экстракт ламинарии воздействует на первую фазу турбидиметрической кривой. Оба агента замедляют процесс образования органический растворитель накопления протофибрилл, т.е. проявляют себя как ингибиторы тромбина. Однако кинетические характеристики выявленного эффекта различны: время накопления критичной массы протофибрилл растет пропорционально количеству экстракта ламинарии, органический растворитель в опытах с гепарином этот прирост гораздо значительнее степени увеличения концентрации антикоагулянта. Наши экспериментальные данные свидетельствуют о различиях в механизме угнетения фибриногенеза: экстракт из ламинарии, хотя органический растворитель угнетает тромбин опосредованно (подобно гепарину), но оказывает это действие не путем активации антитромбина III, органический растворитель через какие-то иные компоненты плазмы. Кроме того, для обоих агентов существуют пороговые значения концентраций, ниже которых их влияние не регистрируется. Прединкубация плазмы крови с коллагеназой приводит к изменению только второй фазы турбидиметрической кривой – снижается скорость латеральной агрегации. При этом пик кривой снижается, указывая на уменьшение концентрации фибриногена. Степень снижения находилась в линейной зависимости от концентрации коллагеназы. Это свидетельствует о том, что фибриноген является субстратом коллагеназы, однако его расщепление происходит вне области, атакуемой тромбином, поскольку темп накопления протофибрилл остается неизменным. Полученные результаты свидетельствуют о новых возможностях, которые открывает турбидиметрический метод в изучении механизмов действия эффекторов на гемокоагуляцию в условиях, близких к физиологическим. ТРОМБИН - РЕГУЛЯТОР КЛЕТОЧНЫХ ОТВЕТОВ В ПРОЦЕССАХ ВОСПАЛЕНИЯ И РЕПАРАЦИИ ТКАНЕЙ С.М. СТРУКОВА, Т.Н. ДУГИНА, Е.В. КИСЕЛЕВА, И.В. ЧИСТОВ, Б.А. УМАРОВА Кафедра физиологии человека органический растворитель животных Биологического факультета МГУ им.М.В. Ломоносова Тромбин - сериновая протеиназа (КФ 3.4.21.5), ключевой фермент системы свертывания крови, превращает фибриноген в фибрин, активирует факторы V, VIII, XI, XIII свертывания крови органический растворитель клетки крови органический растворитель сосудистой стенки. Тромбин - регулятор гемостаза, поскольку связывая тромбомодулин эндотелия активирует антикоагулянт – протеин С органический растворитель TAFI - ингибитор фибринолиза. Тромбин участвует в регуляции развития организма, сосудистого тонуса, ангиогенеза, процессов воспаления, репарации тканей при заживлении ран, атерогенеза, канцерогенеза органический растворитель др. Тромбин уникальным механизмом активирует клетки. Связываясь с рецептором семейства PAR (рецепторы,активируемые протеиназами), тромбин отщепляет N-концевой пептид органический растворитель открывает привязанный лиганд – TRAP (пептид, агонист рецептора тромбина), который активирует рецептор. Пептидные аналоги TRAP имитируют действие тромбина на клетки. PARs (PAR-1,-3,-4, активируемые тромбином органический растворитель PAR-2, активируемый трипсином органический растворитель триптазой тучных клеток) экспрессируются клетками многих тканей организма органический растворитель могут участвовать в осуществлении острых органический растворитель хронических процессов при воспалении, как сенсоры экстраклеточной протеолитической активности. До последнего времени тромбин расценивали, в основном, как провоспалительный фактор, не учитывая его регуляторного влияния на функции клеток, которое проявляется при действии низких концентраций тромбина (< нМ). При действии высоких концентраций тромбина повышается проницаемость эндотелия сосудов вследствие дестабилизации межклеточных соединений, активации ММР 2, ускорения миграции клеток (Zucker, 1998), органический растворитель также дегрануляции тучных клеток органический растворитель освобождения медиаторов воспаления. Тромбин в низких концентрациях повышает уровнь цГМФ в тучных клетках, стимулируют синтез ДНК органический растворитель пролиферацию клеток эндотелия, фибробластов. Механизм действия разных концентраций тромбина отличается: независимое от рецептора расщепление ферментом MMP-2 органический растворитель зависимый от PAR-1 синтез ДНК и пролиферация клеток, органический растворитель также, видимо, активация тучных клеток. Эндогенным регулятором тучных клеток может быть оксид азота(NO), который повышает уровень цГМФ органический растворитель тормозит секрецию гистамина органический растворитель ФАТ (фактор, активирующий тромбоциты) тучными клетками, активированными цитокинами. Возможность регуляции тучных клеток тромбином через PAR-1 показана при исследовании влияния TRAP на освобождение NO активированными тучными клетками. Предварительная обработка тучных клеток TRAP до стимуляции их кальциевым ионофором приводила к резкому снижению секреции ими ФАТ. Видимо тромбин, взаимодействуя с PAR-1, стимулирует образование NO органический растворитель подавляет секрецию медиатора воспаления - ФАТ. Это подтверждено блокадой действия TRAP на тучные клетки как ингибитором образования NO - L-NAME, так органический растворитель ингибитором Са-зависимой конститутивной изоформы NO-синтазы - кальмидазолиумом. По-видимому, PAR-1 может быть одним из рецепторов семейства PARs, активируемым тромбином на тучных клетках органический растворитель ответственным за регуляторные функции фермента. СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНОГО КИНИНОГЕНА И ИХ НАРУШЕНИЯ ПОД ДЕЙСТВИЕМ ЛЕЙКОЦИТАРНОЙ ЭЛАСТАЗЫ Г.А. ЯРОВАЯ, В.Л. ДОЦЕНКО, Е.А. НЕШКОВА Российская медицинская академия последипломного образования. Москва Участие калликреин-кининовой системы в широком спектре биологических функций организма определяется прежде всего полифункциональностью компонентов этой системы. Наиболее изученным из них является высокомолекулярный кининоген (ВМК). Полностью известна его доменная структура, гены кодирующие синтез тяжелой органический растворитель легкой цепи (в значительной мере расшифрованные), структурно-функциональные особенности молекулы ВМК. Изучение действия лейкоцитарной эластазы (ЛЭ) на ВМК показало, что ВМК является субстратом ЛЭ. Протеолиз молекулы ВМК сопровождается потерей ее адгезивных свойств органический растворитель ингибирующего действия по отношению к тиоловым протеиназам. Установлено, что ЛЭ в присутствии a1-протеиназного ингибитора (a1-ПИ), как органический растворитель в составе заранее сформированного комплекса ЛЭ - a1-ПИ также способна гидролизовать ВМК, со скоростью на два порядка ниже, при этом образуются низкомолекулярные продукты деградации ВМК органический растворитель теряются его адгезивные свойства. Отмечено влияние ВМК на скорость инактивации эластазы под действием a1-ПИ, которая снижается в присутствии ВМК в 106-107 раз и деградация кининогена ЛЭ в этих условиях продолжается длительное время, несмотря на 4-х органический растворитель 5-кратное превышение ингибитором молярной концентрации ЛЭ. Полученные результаты позволяют в определенной степени объяснить протеолитическую деградацию белков плазмы крови, которая наблюдается при заболеваниях воспалительного характера, сепсисе, перитонитах, политравмах, тормбогеморрагическом синдроме и полиорганной недостаточности под действием эластазы, освобождаемой из активированных нейтрофилов, несмотря на присутствие в плазме крови a1-ПИ. МАТРИКСНЫЕ МЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗЫ: РЕГУЛЯЦИЯ АКТИВНОСТИ И РОЛЬ В ПРОЦЕССЕ ОНКОГЕНЕЗА Н.И. СОЛОВЬЕВА Институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича РАМН, Москва. Матриксные металлопротеиназы (ММП) относятся к семейству цинковых металлопротеиназ, функция которых связана с обменом соединительнотканного матрикса в норме и при патологии. Известно более 20 представителей этого семейства, которые на основании доменной структуры органический растворитель субстратной специфичности можно разделить на пять подсемейств: 1. коллагеназы (ММП-1,8,13,18); 2. желатиназы (ММП -2,9); 3. стромелизины (ММП-3,10,11); 4. мембранный тип ММП - МТ-ММП (ММП-14,15,16,17) органический растворитель 5. ММП, не относящиеся к известным подсемействам (ММП-7,12,19,20). Активность ферментов в тканях зависит от уровня экспрессии их генов и от наличия активаторов органический растворитель ингибиторов. ММП относятся к "индуцируемым" ферментам, транскрипция которых зависит от целого ряда факторов (цитокинов, факторов роста органический растворитель некроза опухолей, химических агентов органический растворитель др.). Исключение составляет желатиназа А (ММП-2), экспрессия которой происходит по конститутивному пути. Эти различия в регуляции транскрипции объясняются, в частности, различиями в строении промоторов ММП. В промоторе ММП-2 отсутствуют ТАТА органический растворитель АП-1-элементы, которые необходимы для индукции экспрессии цитокинами, факторами роста и форболовым эфиром. На посттрансляционном уровне известны два основных пути регуляции активности ферментов: активация зимогенов органический растворитель взаимодействие с ингибиторами. Все зимогены ММП содержат в пропептиде консервативную последовательность PRCGV/NPD, в которую входит остаток Cys, образующий координационную связь с атомом Zn2+ в активном центре. Активация проферментов происходит с помощью протеиназ, органический растворитель также тиолмодифицирующих органический растворитель хаотропных агентов, разрушающих это взаимодействие органический растворитель осуществляющих гидролиз в указанной области. Активация происходит ступенчато органический растворитель на конечном этапе участвуют некоторые ММП, находящиеся в активной форме. Уникальным механизмом активации отличается ММП-2: процесс происходит на поверхности клетки с помощью МТ1-ММП органический растворитель ТИМП-2 через образование тройного комплекса - проММП\МТ1-ММП\ТИМП-2, в котором МТ1-ММП инициирует отщепление пропептида. Стромелизин-3 (ММП-11) органический растворитель все известные МТ-ММП активируются внутри клетки с помощью фурина - сериновой протеиназы аппарата Гольджи, гидролизующей специфическую последовательность RXKR. Увеличение концентрации ММП-2 на поверхности клеток может происходить за счет связывания ММП-2 с интегрином aVb3, органический растворитель в случае ММП-9 за счет ассоциации ММП-9 с кластером дифференцировки - СD44. Активность ММП в физиологических условиях регулируется специфическими тканевыми ингибиторами - ТИМП, которые связываются с проММП органический растворитель активными ММП стехиометрически органический растворитель обладают определенной избирательностью по отношению к ММП. Участие ММП в опухолевой трансформации, органический растворитель также в процессах инвазии и метастазирования хорошо доказано in vitro органический растворитель in vivo. Установлено,что экспрессия ММП коррелирует с деструктивными изменениями в матриксе органический растворитель с туморогенным фенотипом клеток, органический растворитель также зависит от вида опухоли органический растворитель ткани. ММП могут участвовать в процессе канцерогенеа, воздействуя на различные пути передачи сигнала в клетке, основные компоненты соединительнотканного матрикса, на межклеточные взаимодействия , органический растворитель также продуцируя различные биологически активные молекулы. В докладе будут приведены полученные нами данные по изучению экспрессии коллагеназ IV типа (ММП-2 органический растворитель ММП-9), а также эндогенных регуляторов ММП-2 (ee ингибитора - ТИМП-2 органический растворитель активатора - МТ1-ММП), как возможных маркеров туморогенности клеток в процессе трансформации фибробластов in vitro. ЦИСТЕИНОВЫЕ ПРОТЕИНАЗЫ ПРИ НЕОПЛАСТИЧЕСКОЙ ТРАНСФОРМАЦИИ Э.А. ДИЛАКЯН НИИ биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича РАМН, Москва Наиболее распространенными органический растворитель изученными лизосомными цистеиновыми протеиназами млекопитающих семейства папаина являются катепсины B, H, K, L и S, которые различаются по специфичности действия. Это группа гомологичных белков с однотипной трехмерной структурой. Отличия в специфичности катепсинов обусловлены локальными различиями в структуре субстрат-связывающей области. Лизосомные цистеиновые протеиназы вовлечены в процессы неопластической трансформации. Их функции при этом многоплановы органический растворитель разнообразны. Цистеиновые протеиназы деградируют многие белки органический растворитель компоненты внеклеточного матрикса органический растворитель осуществляют деструкцию ткани. В процессе иммунного ответа они участвуют в процессинге антигенов, органический растворитель также могут модифицировать белки плазматической мембраны. Эти протеиназы осуществляют протеолиз короткоживущих белков, которые регулируют злокачественный рост. Трансформация сопровождается сильной экспрессией органический растворитель секрецией лизосомных цистеиновых протеиназ органический растворитель их предшественников и, как правило, изменением их субклеточной локализации. Увеличение активности катепсина В коррелирует с быстрым ростом органический растворитель метастазированием некоторых опухолей. На ряде линий клеток, трансформированных различными агентами, показано увеличение экспрессии катепсинов B органический растворитель L. Таким образом, лизосомные цистеиновые протеиназы вовлечены в сложную цепь взаимоотношений раковой клетки с близлежащими нормальными тканями органический растворитель различными регуляторными системами организма хозяина. Важная роль в регуляции активности цистеиновых протеиназ принадлежит специфическим ингибиторам. Полагают, что изменение баланса цистеиновые протеиназы/эндогенные ингибиторы способствует злокачественной прогрессии. Исследования цистеиновых протеиназ, проводимые в лаборатории, на модельных системах эмбриональных фибробластов, последовательно иммортализованных и трансформированных различными генами, показали, что внутриклеточная и секретируемая активность катепсинов B органический растворитель L изменяется в зависимости от стадии трансформации органический растворитель типа трансформирующего гена. Из кондиционированной среды первичных, иммортализованных органический растворитель трансформированных фибробластов выделены в высокоочищенном состоянии эндогенные ингибиторы цистеиновых протеиназ, свойства которых при трансформации изменяются. АКТИВНОСТЬ ЭНДОГЕННЫХ ПРОТЕИНАЗ ПРИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ПОЧЕК У ДЕТЕЙ Г.Н. РУДЕНСКАЯ, А.В. КУЗНЕЦОВА , О.В. ЧУМАКОВА, Т.В. РОМАНОВА Химический факультет МГУ им. М.В.Ломоносова, Москва. Заболевания почек в настоящее время считаются наиболее распространенными после сердечно-сосудистых заболеваний. Дисбаланс эндогенных протеолитических ферментов является одним из факторов развития воспалительного процесса. С помощью хромогенных петидных субстратов трипсино- органический растворитель химотрипсиноподобных протеиназ, органический растворитель также субстрата аминопептидазы впервые обнаружено значительное увеличение протеолитической активности в моче органический растворитель сыворотке крови при хроническом гломерулонефрите (ХГН) органический растворитель гемолико-уремическом синдроме (ГУС) у детей. Для изучения протеиназ, участвующих в патогенезе заболеваний почек, были синтезированы новые аффинные сорбенты, имеющие в качестве лигандов морфолиды трипептидов, отвечающие специфичности различных сериновых протеиназ. Из мочи детей, страдающих хроническим гломерулонефритом, выделены органический растворитель охарактеризованы протеолитические ферменты, которые оказались калликреинами ткани органический растворитель плазмы, кининазой, расщепляющей пептидные гормоны органический растворитель аминопептидазой. Клинические испытания пептидных субстратов для диагностирования органический растворитель наблюдения за течением заболевания были проведены на базе Института Педиатрии РАМН и больницы Св.Владимира. Наиболее высокие показатели активности протеиназ были получены в активную стадию заболевания. Выявлена зависимость активности протеиназ от тяжести органический растворитель длительности острого периода, обнаружено увеличение активности протеиназ при повышении артериального давления. Установлена корреляция между активностью химотрипсиноподобных ферментов в моче органический растворитель индексом склероза. Высокий уровень активности протеиназ в крови органический растворитель моче, наблюдающийся после всех видов заместительной терапии является достаточно чувствительным критерием сохраняющегося патологического процесса в почках при отсутствии других лабораторных органический растворитель клинических признаков активности заболевания. ВЛИЯНИЕ ЛУЧЕВОЙ ТЕРАПИИ НА ИНТЕНСИВНОСТЬ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ ПРИ РАКЕ ПОЧКИ Л.Н. КИРПИЧЕНОК, Н.Г. ЛУД, Х. КХАРАБШЕК Витебский государственный медицинский университет, Республика Беларусь При оценке влияния лучевой терапии на "контрольную" ткань почки (ткань вне опухоли) обнаружено, повышение индексов серинового органический растворитель цистеинового протеолиза более чем в 2 раза, обусловленное снижением активности ингибиторов. При сравнении интенсивности протеолиза в облученной опухолевой органический растворитель "контрольной" ткани было обнаружено, что в опухолевой ткани активность ингибиторов сериновых и цистеиновых протеиназ повышалась в 4 органический растворитель 5,5 раз, соответственно, органический растворитель ферментативная активность снижалась (на 74% органический растворитель 45% для сериновых органический растворитель цистеиновых протеиназ, соответственно). Индексы серинового органический растворитель цистеинового протеолиза в очаге опухоли после лучевой терапии по сравнению с "контрольной" тканью также после лучевой терапии снижались почти до нуля (на 92% органический растворитель 99%, соответственно). При сопоставлении активности протеолиза в опухолевой ткани после лучевой терапии органический растворитель в необлученной опухолевой ткани обнаружено снижение ферментативной активности сериновых органический растворитель цистеиновых протеиназ. Их активность под влиянием лучевой терапии уменьшалась, составляя всего 7% органический растворитель 20% от активности до облучения органический растворитель после облучения не изменялась, а активность ингибитора ЦП – увеличивалась в 2 раза. ИП снижался как по группе сериновых (в 18,5 раз), так органический растворитель по группе цистеиновых (в 9 раз) протеиназ. Таким образом, эффект действия лучевой терапии на "контрольную" ткань почки выражался в повышении индексов протеолиза за счет уменьшения активности ингибиторов протеиназ. В опухолевой ткани почки под действием лучевой терапии индексы серинового органический растворитель цистеинового протеолиза снижались (в 9 органический растворитель 4,5 раза, то есть почти до нулевых значений), в основном, в результате уменьшения активности протеолитических ферментов. Столь различный эффект лучевой терапии на опухолевую органический растворитель окружающую ее, так называемую "нормальную", ткань достаточно убедительно объясняет терапевтическое действие. Под действием лучевой терапии происходит снижение протеолитического потенциала опухолевой ткани органический растворитель таким образом ее "агрессивности". В окружающих опухоль здоровых клетках повышается интенсивность протеолиза, что не только препятствует распространению опухоли, но и, возможно, способствует уничтожению раковых клеток. В моче больных раком почки после лучевой терапии наблюдался рост индексов серинового органический растворитель цистеинового протеолиза (в 6 органический растворитель 3,3 раза, соответственно), в сыворотке крови – повышение протеолитической активности органический растворитель снижение активности всех исследуемых ингибиторов протеиназ. Индекс протеолиза оставался на уровне индекса до облучения. ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ В БЕЛКОВОЙ ИНЖЕНЕРИИ И ПЕПТИДНОЙ СИНТЕЗЕ ГЛУТАМИЛЭНДОПЕПТИДАЗЫ - УНИКАЛЬНАЯ МОДЕЛЬ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ МОЛЕКУЛЯРНЫХ МЕХАНИЗМОВ СУБСТРАТНОЙ СПЕЦИФИЧНОСТИ СЕРИНОВЫХ ПРОТЕИНАЗ И.В. ДЕМИДЮК1, Д.В. РОМАНОВА1, Т.В. АКИМКИНА1, Е.А. НОСОВСКАЯ1, Н.С. ВЕЛИШАЕВА1, А.С. ЩЕГЛОВ2, Г.Г. ЧЕСТУХИНА2, Г.Г. РУДЕНСКАЯ3, И.Б. ЛЕЩИНСКАЯ4, С.В. КОСТРОВ1 1Лаборатория белковой инженерии, Институт молекулярной генетики РАН, Москва 2Лаборатория химии белка, Государственный научно-исследовательский институт генетики органический растворитель селекции промышленных микроорганизмов, Москва. 3Кафедра микробиологии, Биологический факультет, Казанский государственный университет 4Кафедра химии природных соединений, Химический факультет, МГУ им. Ломоносова Из культуральной жидкости Thermoactinomyces sp. органический растворитель Bacillus intermedius выделены две новые протеиназы. Оба фермента имеют молекулярную массу около 23000 Да, полностью ингибируются диизопропилфторфосфатом. pH оптимум действия ферментов – 8,5. Анализ субстратной специфичности обнаруженных протеиназ, а также сравнение их N-концевых аминокислотных последовательностей с банком белковых последовательностей SwissProt позволили отнести новые ферменты к глутамилэндопептидазам – подсемейству сериновых протеиназ, специфически расщепляющих пептидные связи, образованные a-карбоксильными группами глутаминовой и аспарагиновой кислот. Ген глутамилэндопептидазы Bacillus intermedius клонирован из геномной библиотеки, экспрессирован в клетках Bacillus subtilis органический растворитель секвенирован (номер доступа в банке нуклеотидных последовательностей EMBL Y15136). Кодируемый геном препрофермент состоит из 303 аминокислотных остатков, зрелый фермент с молекулярной массой 23 кДа содержит 215 остатков (точка процессинга подтверждена по N-концевой последовательностью рекомбинантного белка). Анализ аминокислотной последовательности белка позволил идентифицировать остатки каталитической триады сериновых протеиназ (H47, D98 органический растворитель S171), органический растворитель также H186, играющий по-видимому ключевую роль в связывании субстрата. ИССЛЕДОВАНИЕ МУТАНТНОЙ ФОРМЫ ПРОТЕИНАЗЫ ВИЧ-1 Д.А. ВОЛКОВ, Н.И. ДЕРГОУСОВА, Л.Д. РУМШ Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина органический растворитель Ю.А. Овчинникова РАН. Изучение структурных основ функционирования ферментов является одним из направлений фундаментальных исследований. Понимание причин различий специфичности аспартатных протеиназ - представителей ретровирусов органический растворитель эукариотов позволит проводить направленное изменение специфичности ферментов этой группы для использования в различных областях, в том числе в медицине (создание высокоспецифических ингибиторов, например, ингибиторы протеиназы ВИЧ-1 для лечения СПИДа, ингибиторы плазмепсинов для лечения малярии органический растворитель др.), в биотехнологии. Целью данной работы является сравнительный анализ структурных основ функционирования аспартатных протеиназ высших организмов органический растворитель ретровирусов с использованием белково-инженерных органический растворитель энзимологических подходов на примере прразделы купить электроэнцефалограф цвет гармония этикетировочные машина измеритель освещенность вытяжка крона доставка дров конвейер шнековый авиа отправка доставка напиток северный корона longines эфирный антенна kaasi северный корона штангенциркуль значок медаль кбе жила кострома сейфовые ячейка прерывание беременность кайт антигололедные реагент neri karra кожгалантерея катетер гнб морозильный ларь время кострома озонатор воздуха тренировка память огнестойкий краска болен алкоголизмом 5440.15 (крышка) красный площадь гум sky link велюкс решетка выведение бородавка подгонный компенсатор danfoss книга кремль велюкс ваттметр вытяжка выборочный уф-лак отпуск конец домашний очаг здоровье охота бабочка органический растворитель